спаренных участках, это происходит в месте разрыва – ника. При этом одновременно идут 2 реакции - 5’-3’ экзонуклеазный гидролиз и 5’-3’ полимеразная реакция. В этом случае происходит процесс переноса 1-цепочечного разрыва вдоль цепи ДНК – ник-трансляция. РНК-зависимая ДНК-полимераза (ревертаза, обратная транскриптаза) Осуществляет синтез ДНК на матрице РНК (рис. 20). Обратная транскриптаза состоит из двух субъединиц – α (65 кДа) и β (95 кДа), присутствующих в эквимолярном количестве. Обладает, по крайней мере, тремя ферментативными активностями: 1) ДНК-полимеразной, использующей в качестве матрицы как РНК, так и ДНК; 2) активностью РНКазы Н, гидролизующей РНК в составе гибрида РНК – ДНК, но не одно- или двухцепочечную РНК; 3) ДНК-эндонуклеазной активностью. В генетической инженерии ревертаза используется для целенаправленного синтеза на матричных РНК комплементарных молекул ДНК (кДНК). С помощью этого фермента можно получить библиотеку транскрибируемых генов. Для этого кДНК включают в плазмиды и клонируют их в клетках бактерий. Такие библиотеки кДНК отличаются от библиотеки геномной ДНК тем, что в последней содержатся клоны, в которых не обязательно присутствуют дискретные гены, т.к. рестриктазы могут разрезать ДНК и внутри генов. Нуклеаза Bal 31 Фермент Bal 31 обладает экзонуклеазной и эндокулеазной активностью. Как экзонуклеаза фермент воздействует на оба 3' и 5' конца дуплекса ДНК без образования внутренних разрывов, как высокоспецифичная к однонитевым участкам эндонуклеаза разрезает дуплекс ДНК и РНК в никах, брешах и однонитевых участках. Двунитевые продукты экзонуклеазы являются смесью с тупыми и нетупыми концами. 68