ионов Mg – к выступающему 3’-концу; в присутствии Co – к 3’OH ДНК с тупыми концами или даже с выступающим 5’концом). Поли(A)-полимераза E. coli Эта полимераза катализирует присоединение к 3’-OH одноцепочечных РНК поли(A)- последовательностей. 4.1.2. Способы получения рекомбинантной ДНК Гибридные ДНК конструируют двумя методами: рестриктазно-лигазным и коннекторным. Коннекторный метод являлся первым методом, который в 1972 г. П. Берг с сотрудниками использовал для получения рекомбинантной молекулы ДНК. Этот метод предполагает создание условий для гибридизации продуктов рестрикции разных геномов путем наращивания на их концах комплементарных олигонуклеотидных участков (рис. 21). В процессе создания гибридной ДНК коннекторным методом участвуют 3 фермента: 5’-экзонуклеаза, терминальная нуклеотидилтрансфераза и ДНК-лигаза. К 3'-концам одного из фрагментов ДНК с помощью терминальной трансферазы достраивают одноцепочечные сегменты определенной длины, состоящие из адениновых нуклеотидов (олиго(dA)сегменты), а к концам другого фрагмента – комплементарные им олиго(dT)-сегменты, состоящие из тиминовых оснований. При смешении полученных фрагментов формируются кольцевые структуры за счет водородных связей между олиго(dA)- и олиго(dT)-последовательностями. Одноцепочечные бреши гибридных молекул ДНК застраивают с помощью ДНКполимеразы и цепи ковалентно сшивают лигазой. 70