4.1.3. Клонирование и отбор клонов Клонирование ДНК – это многократное копирование фрагментов ДНК. В классической методике клонирования ДНК используется способность клеток бактерий поглощать и реплицировать плазмиды. Фрагменты ДНК любого вида, полученные с помощью рестриктаз, можно ввести в плазмиду или бактериофаг, получив вектор молекулярного клонирования, а затем размножить эти генетические элементы в клетках бактерий или дрожжей. Вектор – это молекула ДНК, которая способна переносить в клетку чужеродную ДНК и обеспечить там ее амплификацию. Перенос ДНК от одних клеток бактерий в другие основан на трех процессах передачи генетической информации: трансформации, конъюгации, трансдукции. Трансформация – это процесс поглощения ДНК клетками бактерий из внешней среды. Не все бактериальные клетки способны поглощать ДНК, в противном случае не сохранялась бы генетическая индивидуальность, и понятие вида в мире прокариотов было бы поставлено под сомнение. Способность бактериальных клеток поглощать экзогенную ДНК с последующим изменением генома называется генетической компетентностью. Природная компетентность может быть индуцибельной или конститутивной. Процесс трансформации протекает в 3 стадии: 1) ДНК адсорбируется на клеточной стенке; 2) ДНК проникает внутрь клетки; 3) экзогенная ДНК рекомбинирует с клеточной хромосомной ДНК. ДНК может проникать в клетку только в 1цепочечной форме, устойчивой к действию нуклеаз. Конъюгация – однонаправленный перенос генетического материала от донора к реципиенту при непосредственном контакте клеток. Для устойчивого наследования необходимо ее включение в хромосому путем рекомбинации. Реципиент – это любая клетка, способная принимать ДНК от бактерии-донора посредством горизонтального переноса, донор – бактерия, содержащая конъюгативную плазмиду или конъюгативный транспозон и способная предавать ДНК реципиенту путем горизон72